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Detalles de la obra

Título:
Ingeniería de proteínas para elucidar el mecanismo de glutarredoxinas
Autor(es):
Grunberg Eskenazi, Karin
Pie de imprenta:
Montevideo: Universidad ORT Uruguay, 2016
Descripción física:
77 p. fot., tbls., grafs. En línea
Nota de tesis:
Trabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Montevideo, 2016. Calificación: 100/100
Título obtenido:
Entregado como requisito para la obtención del título de Ingeniera en Biotecnología
Tutor:
Bruno Manta Porteiro; Gerardo Ferrer Sueta
Tribunal:
Javier Santos; Martín Fló Díaz
Resumen:
En el presente proyecto, se utilizaron técnicas de ingeniería de proteínas y enzimología para abordar las bases estructurales y cinéticas de las diferencias entre glutarredoxinas (Grx) de clase I y clase II. En base a comparación de secuencias y estructuras, se generaron variantes con mutaciones puntuales o intercambiando elementos de secuencia para convertir Grx de clase I en clase II y viceversa. Adicionalmente, se generaron versiones “humanizadas” de Grx de tripanosomas con el objetivo de analizar los determinantes estructurales de la selectividad por tripanotión. Las proteínas se expresaron y purificaron mediante cromatografía de afinidad y se evaluó la pureza mediante electroforesis desnaturalizante, espectrometría de masa y cromatografía de exclusión molecular analítica. La actividad reductasa de las diferentes variantes se determinó mediante ensayos estándar de actividad Grx (reducción de disulfuro mixto entre GSH y β-mercaptoetanol) y tiorredoxina (reducción de insulina), mientras que la reacción con oxidantes se estudió por espectroscopía de fluorescencia. Por lo tanto, se aportó a la comprensión del mecanismo de Grx, el cual es relevante para entender la biología de estas proteínas. Se confirmó que las Grx de clase II estudiadas son inactivas en el ensayo HED mientras que las de clase I son activas. Los experimentos con versiones ingenierizadas demostraron que la estructura en torno al sitio activo (cercana en secuencia y en el espacio) es esencial para la actividad de las Grx de clase I.
Referencias bibliográficas:
Incluye bibliografía y anexos
Idioma:
Español
Tipo de material:
[Trabajo Final de Carrera]
Ubicación física:
Disponible en línea

Archivos asociados:

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Trabajo final de carrera 3.50MB application/pdf
Informe del corrector 47kB application/pdf