Optimización de la producción de un fragmento de leucotoxina recombinante [Trabajo Final de Carrera]

Vencimiento de confidencialidad: 20/04/2018.

Incluye bibliografía, glosario y anexos

Reolon Baratta, Eduardo Enrique Tucci Pi, Paula Isabel Sanguinetti Acosta, Carlos Julio Grotiuz Scarella, Adolfo German

En este trabajo, el objetivo principal fue producir un antígeno recombinante para incorporar en una nueva vacuna contra la enfermedad del tracto respiratorio bovino (ERB), utilizando un criterio industrial basado en la reducción de costos de producción. Dicho desafío fue planteado por la empresa Virbac Uruguay y se desarrolló en la planta piloto de laboratorios Celsius. Se decidió trabajar con un fragmento de la proteína leucotoxina de Mannheimia haemolytica (FLKT), la bacteria más patógena y comúnmente asociada con la ERB. Se optimizó la expresión de la FLKT recombinante, previo a las etapas de escalado industrial, para mejorar el rendimiento volumétrico. La optimización se realizó, por un lado, a nivel de los componentes del medio de cultivo y los parámetros de la fermentación, con el objetivo de aumentar la biomasa producida y el nivel de expresión de la FLKT. Por otro lado, se analizaron distintas estrategias de lisis celular, empleando disrupción, lisis química, y la combinación de las dos. Se logró optimizar la expresión de la FLKT recombinante en un reactor piloto, luego de poner a punto la concentración inicial de glucosa y alimentando el cultivo de una fuente de nitrógeno. Como resultado de la estrategia de optimización realizada durante esta tesis se escaló el protocolo de laboratorio a la escala piloto, a la vez que se obtuvo un rendimiento del proceso más de 3 veces superior al obtenido inicialmente, lo que permite viabilizar la producción industrial de esta proteína.

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